近年來，siRNA 脂質納米顆粒（siRNA-LNP）憑借優異的靶向遞送能力，已成為基因治療、核酸藥物研發的核心載體。

但在實際制劑開發與儲存過程中，LNP 結構易破壞、RNA 易降解、室溫穩定性差，一直是困擾研發人員的痛點。傳統工藝常用 PBS 磷酸鹽緩沖液，卻容易誘發脂質氧化、生成 RNA - 脂質加合物，最終導致制劑藥效衰減、質量失控。而組氨酸緩沖液的應用，有望破解了這一行業難題。

穩定性對比：組氨酸緩沖液更顯優勢

研究顯示，組氨酸緩沖液在室溫下（25°C）儲存的siRNA-LNP穩定性顯著高于傳統PBS緩沖液：

? 在初始時間點，組氨酸緩沖液（10 mM，pH 6.0，含 140 mM NaCl，滲透壓與 1×PBS 匹配）中的siRNA-LNP在外觀上與PBS緩沖液中的siRNA-LNP相似，但是六個月后，與PBS緩沖液中siRNA-LNP可見的聚集現象相比，組氨酸緩沖液中的siRNA-LNP即使在室溫下放置仍保持半透明狀態；（圖1）

? 在2-8℃和25°C條件下，PBS緩沖液中siRNA在24周內發生明顯降解，而在組氨酸緩沖液，極大程度減少了siRNA的降解。（圖2）

? 在相同條件下儲存6個月后，在組氨酸緩沖體系中，其粒徑、多分散指數（PDI）和封裝效率均未發生顯著變化，均優于PBS緩沖體系。（圖2）

這一結果表明，組氨酸緩沖液顯著延長了藥物的室溫穩定性。

圖1：將LNP樣品從2–8 °C或25 °C的儲存條件下取出，并拍攝長達六個月的照片。紅色箭頭指示相分離發生的位置

圖2：在不同緩沖體系中，平均粒徑、PDI、包封率、完整的siHPRT 反義鏈、完整型 siHPRT 正義鏈 在不同溫度下隨時間變化情況

組氨酸抑制RNA-lipid加合物的形成

脂質氧化是siRNA-LNP降解的核心問題。研究表明，不飽和脂質（如MC3）在PBS中易生成親電性降解產物（E,Z-dienone），引發RNA-lipid加合物形成（圖3）。

? 在PBS中和tris緩沖液中，E,Z-dienone28天的生成率可達8%，而在組氨酸緩沖液中降至<1%以下（圖4C）。

? 在Tris緩沖液中封裝于LNP后，約68%的反義鏈發生脂化，相比之下，在組氨酸緩沖液中，僅檢測到約0.1%的脂化反義鏈（圖 4E）。

? 此外，還觀察到不必要的PS-PO轉化，每條鏈發生一次、兩次甚至三次，當LNP分別儲存在含磷酸鹽或Tris的緩沖液中時，完整反義鏈的含量分別下降至12%或1%，而組氨酸緩沖液中的完整反義鏈含量依舊保持在84%以上（圖 4F）。

組氨酸緩沖液的弱酸性環境抑制了脂質氧化反應，減少了RNA-lipid加合物的形成，從而維持siRNA完整性。

圖3：MC31氧化生成 E,Z-二烯酮副產物2、RNA-脂質加合物的可能機制

圖4：在不同緩沖液中 E,Z-二烯酮副產物2副產物、RNA-脂質加合物比例、完整 siHPRT 反義鏈 ( F)的百分比

在 siRNA-LNP 制劑開發的全流程中，緩沖體系的選擇直接影響制劑的儲存周期、質量可控性與臨床轉化潛力。

組氨酸緩沖液憑借抑制脂質氧化、減少 RNA - 脂質加合物生成、維持膠體穩定性三大核心優勢，解決了傳統 PBS 體系的痛點，為核酸藥物的處方優化與工藝開發提供了一定的數據支撐。

未來，隨著核酸藥物研發的持續推進，組氨酸緩沖液有望成為更多 siRNA-LNP 制劑的“標配"，助力更多治療藥物從實驗室走向臨床，為患者帶來新的治療希望。